酵母顯示載體 pYDS1

mAb001

pYDS1是單體scFv的酵母顯示載體顯示在酵母菌株EBY100表面上。AGA1是酵母細(xì)胞表面蛋白和 AGA2通過(guò)2個(gè)二硫鍵偶聯(lián)到AGA1。通過(guò)融合到 C 端 AGA2通過(guò)鉸鏈，scFv顯示在酵母表面上。N 處的標(biāo)志標(biāo)簽 scFv C 終點(diǎn)站的終點(diǎn)站和 V5 標(biāo)簽的設(shè)計(jì)是為了方便通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)scFv表達(dá)和抗原結(jié)合。（G4S）3 柔性接頭被設(shè)計(jì)為VL和VH之間的內(nèi)接頭。這個(gè)向量設(shè)計(jì)用于VL和VH的逐步克隆以及VH的所有酶位點(diǎn)和VL克隆不出現(xiàn)在VH和VL種系基因和翻譯的氨基酸有利于形成柔性接頭。

酵母分泌表達(dá)載體pYS1

mAb004

通過(guò)磁性和流式分選富集抗原特異性酵母顯示群體后，可以使用流式細(xì)胞術(shù)鑒定高親和力的單個(gè)scFc克隆。然而，這既費(fèi)時(shí)又費(fèi)力，以后需要將顯示器scFvs轉(zhuǎn)化為可溶性形式，以進(jìn)行親和力和其他表征。 如果將顯示scFv轉(zhuǎn)換為可溶性scFv，然后使用高通量ELISA來(lái)鑒定單個(gè)克隆，則會(huì)更有效。載體pYS1和pYS2是pYDS1、pYDS1.1和pYDS2的對(duì)應(yīng)物，設(shè)計(jì)用于可溶性scFv表達(dá)。只需使用 PCR 從富集的顯示酵母群體中擴(kuò)增 scFv 基因，并使用線(xiàn)性化載體 pYS1、pYS1.1 或 pYS2 共轉(zhuǎn)化為 YVH10 酵母菌株，挑選單個(gè)克隆，在 96 個(gè)深孔板中培養(yǎng)和誘導(dǎo)，含有上清液的 scFv 即可進(jìn)行 ELISA 鑒定。陽(yáng)性克隆可以從96孔原液中擴(kuò)增，用于大規(guī)模scFv純化，以進(jìn)一步表征。載體 pYS1 與 pYDS1 和 pYDS1.1 配對(duì)用于單體 scFv 表達(dá)，pYS2 與 pYDS2 配對(duì)用于調(diào)光器 scFv 表達(dá)。

噬菌體展示載體

 pDCK1

mAb006

載體pDCK1和pDCL1分別包含一個(gè)IgG1的CH1常數(shù)區(qū)域，以及一個(gè)κ常數(shù)和一個(gè)λ常數(shù)區(qū)，只需將VL/VK和VH克隆到載體中即可顯示Fab。所有恒定區(qū)域都針對(duì)大腸桿菌表達(dá)進(jìn)行了密碼子優(yōu)化，并且所有設(shè)計(jì)用于有效消化和連接的酶位點(diǎn)均未出現(xiàn)在抗體V基因中。 長(zhǎng)材料序列專(zhuān)為VK/VL和VH克隆酶而設(shè)計(jì)，可實(shí)現(xiàn)高效的酶消化。這兩種載體也可用于使用Xba I / Not I消化構(gòu)建噬菌體展示scFv文庫(kù)。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體pMAM1

mAb013

載體 pMAM1 設(shè)計(jì)用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞（如 CHO 或 HEK293 細(xì)胞）中的高效分泌蛋白表達(dá)。蛋白質(zhì)表達(dá)由有效的CMV啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)，由一種VH3信號(hào)肽領(lǐng)導(dǎo)，該肽是B淋巴細(xì)胞中大多數(shù)抗體分泌的天然產(chǎn)物，然后是His8標(biāo)簽以方便蛋白質(zhì)純化。多克隆位點(diǎn)中的酶專(zhuān)為方便高效的基因克隆而設(shè)計(jì)。 重組蛋白可以直接從上清液中純化。如果使用無(wú)血清哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，一步鎳樹(shù)脂純化產(chǎn)生高純度蛋白質(zhì)。新基因表達(dá)盒允許通過(guò)G418選擇建立穩(wěn)定的表達(dá)細(xì)胞系。