RNA提取的注意事項(xiàng)

一、如何保存提取出的RNA？

提取后溶解于RNase-free Water中，RNA樣品建議立即進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)，如需儲(chǔ)存，建議分裝保存于-80℃。避免多次取用樣品，反復(fù)凍融。

二、為什么提取的RNA有降解？

1.使用的組織材料不新鮮。提取RNA應(yīng)采用新鮮的組織材料，或?qū)⑿迈r組織材料用液氮迅凍后置于-80℃保存。

2.提取RNA時(shí)使用的試劑及耗材中混有RNase。

三、RNA分離過程中水相與有機(jī)相分離不全，提取的RNA含量低。

可能是氯仿混合不充分，離心時(shí)轉(zhuǎn)速不夠或離心時(shí)間太短。使得回收的RNA水相低于500 µL。

四、如何防止提取RNA過程中RNA的降解？

1.實(shí)驗(yàn)過程中使用的玻璃器皿使用前可于180 ℃干烤8 h以上，塑料制品要用氯仿沖洗。焦磷酸二乙酯（DEPC）是RNase的強(qiáng)烈抑制劑，RNA提取過程和逆轉(zhuǎn)錄過程中所用的水用DEPC處理；

2.實(shí)驗(yàn)人員的手為RNase的重要污染源，進(jìn)行RNA實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)始終戴手套，并應(yīng)勤換手套；

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