競爭法ELISA的原理是什么？

你知道競爭法ELISA的原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！

競爭法ELISA（也稱抑制或封閉法ELISA）通過定量某種樣品分析物對預(yù)計信號的干擾，來測定該分析物在樣品中的含量，可通過以下方式進(jìn)行：微孔板用一種分析物或一種對靶標(biāo)分析物具有特異性的抗體包被（即直接法和間接法），再添加一種有部分某種檢測的靶標(biāo)分析物，以競爭結(jié)合抗體上的位點。信號與分析物含量呈負(fù)相關(guān)，因此，如果靶標(biāo)分析物的濃度較分析物高，靶標(biāo)分析物競爭性結(jié)合有xian量的標(biāo)記抗體，參考信號將會較靶標(biāo)分析物的濃度較低的情況增強(qiáng)。

競爭法的理論基礎(chǔ)是xian量抗體，只有在xian量抗體基礎(chǔ)上，兩種抗原才會形成競爭關(guān)系。該方法一般用來檢測具有較少表位的小分子物質(zhì)。

競爭法ELISA是一種較少用到的ELISA檢測機(jī)制，一般用于檢測小分子抗原，其操作步驟為：

1. 將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體

2. 加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)

3. 加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié)，即所謂競爭法之由來。

4. 洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素底物使酵素呈色，當(dāng)檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺。

5. 當(dāng)需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時，一般會考慮使用競爭法ELISA。

當(dāng)需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時，一般會考慮使用競爭法ELISA。

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