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        ELISA實驗三類樣本的處理方法

         更新時間:2024-01-16    點擊量:994
          用于ELISA實驗的樣本有多種類型,包括血清、血漿、細胞培養上清、尿液以及組織勻漿等。不同樣本類型的預處理方法存在差異。合適的樣本預處理,是確保ELISA實驗準確性的第一步。下面讓我們一起來看看ELISA實驗三類樣本的處理方法吧!
         
          一、液體樣本
         
          1. 血清
         
          血清是ELISA實驗常用的樣本,其預處理也十分簡單。使用無熱原無內毒素的試管或離心管采集血液樣本,將試管或離心管在室內溫度下放置自然凝固(視室溫環境10分鐘到2小時不等)或4℃過夜,分離出血清,(建議傾斜試管或離心管以擴大液面的橫截面,使血清能更大程度的分離出來,),2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉/分鐘),仔細收集上清,立即進行測定,建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存,避免反復凍融,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
         
          2. 血漿
         
          應根據標本的要求選擇EDTA、肝素鈉、枸櫞酸納或檸檬酸鈉作為抗凝劑,使用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液樣本,采集后30分鐘內,混合10-20分鐘后,2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉/分鐘),仔細收集上清液(血漿),建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存,避免反復凍融。樣本應避免溶血或高血脂。保存過程中如有沉淀形成,使用前應該再次離心。
         
          二、固體樣本
         
          1. 組織標本
         
          切割標本后,稱取1g組織,加入9ml的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。2-8℃條件離心5分鐘左右(5000-6000轉/分鐘),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,使用前應再次離心。對于植物組織,不好勻漿的話,就在液氮中充分研磨。
         
          2. 細胞內蛋白樣本
         
          許多待測蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細胞內的蛋白,這個時候,要先收集細胞,洗滌干凈,再破碎細胞,離心取上清。
         
          三、植物樣本
         
          1. 標本的精采集及保存
         
          取0.1g(誤差±3%以內)新鮮植物組織樣本,在液氮中充分研磨;加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20℃過夜;于4℃,8000rpm,離心1小時,取上清。
         
          上清液過C-18固相萃取柱。具體步驟是:80%甲醇(1ml)平衡柱→上樣→收集樣品→移開樣品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循環。過柱后的樣本真空干燥或氮氣吹干,保存備用。
         
          上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液(1ml定容)?;靹蚝笫覝胤胖?0分鐘,然后4℃離心(8000rpm,15分鐘),取上清并暫時保存于4℃待用。
         
          2. 植物標本中相關酶或蛋白的測定(粗提取)
         
          新鮮植物組織請在液氮中充分研磨;加入樣品體積9倍的提取液(pH 7.4 PBS緩沖液),請于4℃,8000rpm,離心30分鐘,取上清并暫時保存于4℃待用。
         
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