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乳腺癌3D類器官培養基產品說明：乳腺癌類器官培養基（Breast Carcinoma Organoid Medium）是一款促進乳腺癌類器官體外形成和擴增的培養基。該產品為無菌的液體混合系統，含有維持目的細胞生長所必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物和生長因子等。該培養基的*配方可以提供一個合適的細胞所需營養環境，選擇性地促進人乳腺癌類器官的體外生長和擴增。
乳腺癌3D類器官培養基產品優勢：
(1) 培養成功率高
(2) 體外持續擴增
(3) 保持腫瘤特征
(4) 藥敏結果與臨床數據接近
使用說明：
? 實驗前準備
（1）提前將24孔細胞培養板置于37℃的培養箱中預熱過夜。
（2）將15mL無菌離心管、1.5mLEP管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30 min。
（3）提前30 min從4 ℃冰箱取出乳腺癌類器官培養基平衡至室溫。（4）提前從-20℃冰箱取出所需體積的細胞外基質膠冰上融化。（5）配置含1%BSA的DMEM培養基冰上預冷備用。
? 乳腺癌類器官培養
（1）將取自乳腺癌患者的樣本進行分離和消化，消化后的細胞懸液進行計數。
（2）按每孔1~2×10*個細胞密度計算所需細胞數，根據計算好的體積吸取細胞懸液加入預冷的1.5mL離心管中，離心，棄上清，將細胞沉淀置于冰上。
（3）按1∶2體積比，將一份體積的含1%BSA的DMEM加入2份體積的的細胞外基質膠（Corning#356231）中，輕輕混勻（全程冰上操作），然后在冰上將配好的基質膠混合液與細胞沉淀充分混勻。
（4）將細胞沉淀與基質膠的混合液按照35μL/孔滴在已提前預熱好的24孔板中央，使之形成圓頂狀膠滴。緩慢將細胞培養板移至培養箱至少30分鐘。
（5）待基質膠*凝固，沿24孔壁緩慢加入1mL/孔預先恢復至室溫的本類器官培養基，并將培養板置于37℃，5%CO2條件下靜置培養。
（6）鏡下觀察類器官形成情況，每3~4天更換一次培養基。
? 乳腺癌類器官收集
（1）棄去培養基，用基質膠解離試劑潤洗槍頭后，每孔加入1mL該試劑，靜置1min。
（2）用基質膠解離試劑潤洗槍頭后，吸取孔內液體，輕輕吹打圓頂狀膠滴表面，將膠滴吹散，并將吹散后的含類器官的混合液收集至15 mL離心管中。
（3）重復一次上述操作，將兩次洗脫下來的類器官合并收集于同一15mL離心管中。
（4）37℃，75rpm水平搖床上解離10min（具體解離時間根據實際情況決定，以無明顯大塊膠狀物為準）。
（5）10分鐘后在4℃下，300g，離心5min，小心吸棄上清，沉淀待用。
? 乳腺癌類器官傳代
（1）收集好的細胞沉淀（以無肉眼可見基質膠狀沉淀為準）加入預冷的含1%BSA的DMEM培養基重懸，在4℃下，300g，離心5min。
（2）小心吸棄上清，沉淀用含1%BSA的DMEM培養基重懸計數。
（3）按照培養步驟操作，以大約1000個類器官/孔密度重新接種類器官，繼續擴大培養。
注意事項：
1.本產品在使用前需平衡至室溫。
2.使用產品時應注意無菌操作，避免污染。
3.本產品中不含血清，含有抗生素，如無特別需要，不用額外添加血清和其他抗生素，可直接使用。
4.為保持本產品的最佳使用效果，不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環境中。5.請于保質期內使用本產品，超出保質期后，將無法達到理想的使用效果。
6.乳腺組織樣本建議為腫瘤術中樣本，且腫瘤細胞比例越高（至少>50%），培養成功率越高，不推薦用于少量樣本（如穿刺或循環腫瘤細胞）的培養。
7.本產品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。
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孫經理
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